Ќа правах рукописи

ћасимов Ёдуард Ќусратович


ѕ–»ћ≈Ќ≈Ќ»≈ –ќЌ ќЋ≈… »Ќј® — ÷≈Ћ№ё  ќ––≈ ÷»» »ћћ”ЌЌќ√ќ —“ј“”—ј —ќЅј  ѕ–»  ќ∆Ќџ’ «јЅќЋ≈¬јЌ»я’


 

03.01.06 - биотехнологи€ (в том числе бионанотехнологии)
06.02.02 – ветеринарна€ микробиологи€, вирусологи€, эпизоотологи€, микологи€ с микотоксикологией и иммунологи€


ј¬“ќ–≈‘≈–ј“
диссертации на соискани€ ученой степени кандидата биологических наук

 

ўелково – 2011
–абота выполнена в отделе иммунологии ¬сероссийского исследовательского
и технологического института биологической промышленности
–оссийской академии сельскохоз€йственных наук

Ќаучный руководитель:

доктор биологических наук
ћатвеева »рина Ќиколаевна

Ќаучный консультант:

доктор биологических наук
—ургучева Ћили€ ћихайловна

ќфициальные оппоненты:

доктор биологических наук
—котникова “ать€на јнатольевна;
«аслуженный де€тель науки –‘,
доктор ветеринарных наук, профессор
√аврилов ¬ладимир јндреевич 

¬едуща€ организаци€:

—анкт-ѕетербургска€ государственна€ академи€ ветеринарной медицины

«ащита состоитс€ 25 но€бр€ 2011 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ƒ 006.069.01 при √Ќ” «¬сероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» –ј—’Ќ по адресу: 141142, ћосковска€ область, ўелковский район, п/о  ашинцево, пос. Ѕиокомбината, д. 17,  ¬Ќ»“»Ѕѕ.
E-mail: vnitbp@mail.ru
— диссертацией можно ознакомитьс€ в библиотеке √Ќ” «¬сероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» –оссельхозакадемии.
јвтореферат разослан 24 окт€бр€ 2011 года.
”ченый секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук ё.ƒ. ‘ролов

1.ќЅўјя ’ј–ј “≈–»—“» ј –јЅќ“џ

јктуальность темы. Ќесмотр€ на интенсивное развитие ветеринарной медицины мелких домашних животных, кожна€ патологи€ собак остаетс€ самой  распространенной и сложной в диагностике проблемой. ѕо данным многих исследователей (ћ.ё.Ћопатина (2004), —.».Ћебедько (2004), Ќ.».Ћев€шова (2009), “.¬.Ќовикова и др.(2010), J.S.Mason (1998), D.N.Carlotti (2003)  в насто€щие врем€ более 25% случаев обращений владельцев собак к ветеринарным специалистам св€зано с заболеванием кожи и  ее состо€ние   во многих случа€х €вл€етс€ показателем общего здоровь€ животного.
 ожа обеспечивает барьерную функцию, преп€тствует потери воды, электролитов и механически защищает организм животного от неблагопри€тных воздействий окружающей среды.  роме того, кожный покров отвечает за температурную регул€цию, синтез и накопление витамина D, жиров, углеводов и белков. ѕоверхность кожи обладает антибактериальными и противогрибковыми свойствами. ѕричинами заболеваний кожного покрова собак могут быть различные травмы, бактерии, грибки, вирусы и эктопаразиты. јнализ многочисленных литературных источников свидетельствует о важной роли иммунологических нарушений в механизмах возникновени€ и развити€ кожных патологий у животных (ё.Ќ.‘едоров (2000), ».ћ. ƒонник (2000), Ќ.¬.ћонов (2002), ¬.ј.„ерешнев и др. (2003), ё.Ќ.‘едоров (2008), ћ.ё.Ћопатина (2004) и др.).
ѕо мнению —.ј.Griffin, K.W.Kwochka (1993), ≈.—.  узнецовой  и др.(2002) многие кожные болезни вызываютс€ банальной микрофлорой (бактери€ми и грибками), которые €вл€ютс€ посто€нными обитател€ми кожи, а их повышенна€ колонизаци€ приводит к хронизации  инфекционного процесса, что св€зано с иммунодефицитным состо€нием организма. јналогические данные изложены в научных стать€х ».».¬ершинина и др. (2003), ё.Ќ.‘едоров (2000), ћ.ј.ћедведева (2003) и др. јвторы указывают, что демодекоз собак относитс€ к наиболее часто встречаемым и трудно поддающимс€ лечению заболевани€м, так как инвазионный процесс всегда сопровождаетс€ иммунологической недостаточностью организма.
ƒетальное изучение иммунологических показателей собак, страдающими различными кожными патологи€ми, позвол€ет ввести коррекцию в стратегию лечени€ с помощью иммуномодулирующих препаратов. — начала XXI века в ветеринарной практике успешно примен€ютс€ цитокины и интерлейкины при различных патологи€х сельскохоз€йственных и мелких домашних животных. ќдним из производных цитокина и интерлейкина €вл€етс€ –онколейкин®. ¬ доступной литературе мы не нашли применени€ данного препарата при кожных патологи€х животных.
ѕриведенные выше обсто€тельства и определили актуальность и направлени€ насто€щей работы.

÷ели и задачи исследований. ÷елью исследований €вл€лось изучение гематологических и иммунологических показателей при кожных болезн€х  различного генеза и определение эффективности –онколейкина® дл€ коррекции иммунного статуса животных. ƒл€ реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

  1. ќпределить клинический, гематологический и иммунный статус у собак различного возраста и породы, при кожных патологи€х различного генеза.
  2. ќпределить диагностический алгоритм кожных болезней и их место в структуре патологии у собак.
  3. »зучить динамику гематологических и иммунологических показателей больных собак при применении –онколейкина® в качестве иммуно-стимулирующего средства.
  4. ќпределить терапевтическую эффективность –онколейкина® при заболевани€х кожи различного генеза у собак.
  5. –азработать рекомендации по коррекции иммунного статуса у собак с заболевани€ми кожи различного генеза.

Ќаучна€ новизна. ¬ результате проведенной работы:

  • комплексно изучены этиопатогенетические аспекты кожных патологий собак, обусловленных бактери€ми, патогенными грибами и клещами рода  Demodex;
  • определены параметры гематологических и иммунологических показателей собак при пиодерми€х, дематофитозах и демодекозах;
  • установлено, что болезни кожи собак различного генеза всегда сопровождаютс€ значительными изменени€ми в морфологическом, биохимическом и иммунологическом составе крови и сыворотки крови;
  • впервые на основе клинических, бактериологических, микологических, арахнологических, гематологических и иммунологических исследований обоснована целесообразность применени€ препарата –онколейкина® в комплексе терапии собак при пиодерми€х, дерматофитозах и демодекозах дл€ коррекции иммунного статуса организма.

ѕрактическа€ значимость работы. –езультаты гематологических и иммунологических исследований используютс€ при диагностике и оказании лечебной помощи больным с кожной патологией собак.
ѕрименение –онколейкина® у собак с кожными заболевани€ми различного генеза,  сопровождающимис€ вторичными иммунодефицитными состо€ни€ми, повышает эффективность терапии и значительно сокращает сроки выздоровлени€.
–езультаты исследований используютс€ в учебном процессе при чтении лекций и проведени€ практических зан€тий на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней  и паразитологии и инвазионных болезней животных дл€ студентов факультета ветеринарной медицины и ветеринарным врачам клиник на факультете повышени€ квалификации в ћ√ј¬ћиЅ.
–азработаны методические положени€ по определению иммунного статуса животных, утвержденые академик-секретарем отделени€ ветеринарной медицины –ј—’Ќ 01.06.2011г.
–азработаны «ћетодические рекомендации по применению препарата в комплексной терапии собак при кожных патологи€х.  –екомендации утверждены директором ¬Ќ»“»ѕЅ  27 сент€бр€ 2011г.

ќсновные положени€, выносимые на защиту:

  1.  линический, иммунологический и гематологический статус собак, при кожных патологи€х различного генеза.
  2. ƒинамика гематологических и иммунологических показателей больных собак при применении –онколейкина® в качестве иммунокорректирующего средства.
  3. “ерапевтическа€ эффективность –онколейкина® при заболевани€х кожи собак различного генеза.

јпробаци€ работы. ќсновные положени€ диссертационной работы отражены в итоговых отчетах √Ќ” ¬Ќ»»“Ѕѕ  за 2010-2011гг. ћатериалы доложены и обсуждены на заседани€х ученного совета √Ќ” ¬Ќ»»“Ѕѕ (2010-2011гг), а также на конференции «јктуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных», посв€щенной 100-летию со дн€ рождени€ бывшего ректора  азанской академии ветеринарной медицины профессора ’.√.√изатуллина, 26 но€бр€ 2010г. ( азань, 2010), на ћежрегиональной научно-практической конференции «јктуальные проблемы ветеринарии и животноводства», —амара, 2010, на ћеждународной научно-практической конференции ««адачи ветеринарной науки в реализации  доктрины продовольственной безопасности –оссийской ‘едерации» 16-17марта 2011г. (ѕокров, 2011г.), на конференции молодых ученых ћосковской государственной академии  ветеринарной медицины и биотехнологии (27 апрел€ 2011г.) г. ћосква.

ѕубликации результатов исследований.  ѕо материалам диссертации в трудах, сборниках и материалах научной конференции опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендованных ¬ј  –‘.

ќбъем и структура диссертации. ƒиссертаци€ изложена на 146 страницах машинописного текста и включает: ќбща€ характеристика работы, обзор литературы, собственные исследовани€,  обсуждени€ полученных результатов, выводы, практические предложени€, список используемой литературы, включающего 169 источников, в том числе 75 иностранных, приложени€. –абота иллюстрирована 27 таблицами и 8 рисунками.

2. —обственные исследовани€

2.1. ћатериалы и методы

ƒиссертационна€ работа выполнена в период 2009-2011 годы в отделе иммунологии ¬сероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности –оссийской академии сельскохоз€йственных наук.
ƒл€ выполнени€ поставленных задач были выбраны клинические, бактериологические, микологические, арахнологические, гематологические и иммунологические методы исследовани€.
ќсобое внимание удел€ли наличию признаков зуда, его интенсивность, врем€ по€влени€ и характер экссудатов, наличие местной температуры. ¬сего клинически обследовано 2785 собак различных пород и возраста.
Ѕактериологическому исследованию подвергнут патологический материал от 328 собак, имевших характерные клинические признаки пиодермии. — целью подтверждени€ дерматофитозов при помощи люминесцентных ламп ѕ– -4 и ќЋƒ-41 подвергнуты исследовани€м 246 проб волос и корочек, вз€тых с мест поражений. јрахнологическим исследовани€м подвергались 246 соскобов из пораженных участков кожи. √ематологически исследовано 286 проб крови, вз€тых от больных собак в начале болезни, в период курса лечени€ и по выздоровлению.
ќпределение иммуноглобулинов в сыворотке крови проводили методом осаждени€ сульфатом цинка (¬.ћ.’олод, √.‘.≈рмолаев, 1988). Ѕактерицидную активность сыворотки крови определ€ли фотоэлектроколориметирическим методом по —мирновой ќ.¬.,  узьминой “.ј. (1979). Ћизоцимную активность сыворотки крови определ€ли фотоэлектроколориметрическим методом по ƒорофейгуку ј.√. (1968). ÷иркулирующие иммунные комплексы определ€ли методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликол€. ќпределение фагоцитарной активности гранулоцитов исследовали методом  олабской Ћ.—. (1987), с использованием агаровой тест-культуры Staphilococcus aureus и с использованием краски –омановского-√имза.
Ёффективность –онколейкина® изучали в комплексе терапии собак, имевших клинические признаки кожных поражений. ѕрепарат назначалс€ в дозировке 10  тыс. ћ≈/кг, дл€ подкожного введени€, через каждые сутки, в количестве 3-х инъекций. ѕомимо –онколейкина® были применены средства лечени€ собак, различных кожных патологий.
ѕолученные цифровые данные подвергали статистической обработке с использованием стандартных прикладных программ, определ€ли средние величины (ћ) и критерий достоверности —тьюдента (».ѕ.јшмарин, ј.ј.¬оробьев, 1963).

2.2. –езультаты бактериологических и клинических
исследований собак при пиодерми€х

Ѕолезни кожи, вызываемые бактери€ми, прин€то называть пиодерми€ми. — целью определени€ видового состава бактерий с пораженных участков кожи собак брали биологический материал (корочки экссудата, волосы) и отправл€ли в ветеринарную лабораторию. ¬сего бактериологически исследовано 328 проб соскобов из пораженных участков кожи. –езультаты исследований приведены в таблице 1, из которой видно, что в 63% случаев были выделены Staphilococcus aureus, в 34%- St.saprophyticus, в 19%- Streptococcus pyogenes, в 16%- Echerichia coli, в 15% - Pseudomonas aeruginosa и в 9% случаев Proteus Vulgaris. “аким образом, из патологического материала изолировались различные бактерии (стафилококки, стрептококки, кишечна€ палочка, синегнойна€ палочка, протей) во всех случа€х в различных ассоциаци€х.

“аблица 1.
–езультаты бактериологических исследований при пиодермитах собак.


є п/п


ѕороды собак

 олич. исслед. проб

¬иды выделенных бактерий (% от исследованных проб)

1.
2.
3.
4.

5.
6.
7.
8.
9.
Ќемецка€ овчарка
–отвейлер
“акса (жесткошерста€)
јмериканский стаффордшийский терьер
ѕудель (малый)
ƒог (немецкий)
ѕекинес
Ўарпей
—обаки других пород и беспородные
64
23
14
20

40
11
7
8
57
1.Staphiloccocus auteus-63%
2.St.epidermaticus-34%
3.St. saprophyticus-27%
4.Streptococcus puogenes- 19%
5. Echerichia coli-16%
6.Pseudomonas aeruginosa-15%
7.Proteus vulgaris-9%

–езультаты проведенных исследований показали, что поверхностные и глубокие пиодермии кожного покрова собак имеют широкое распространение, в развитии их этиопатогенеза участвуют различные микроорганизмы, в том числе патогенные стафилококки, а так же факторы внешней и внутренней среды.
ѕиодермию можно классифицировать в соответствии с клинической картиной и глубиной поражени€ дермы. ¬ зависимости от этого при клиническом обследовании  больных собак различали поверхностную, неглубокую и глубокую пиодермию.
” собак до одного года в основном регистрировали поверхностную пиодермию, дл€ которой характерными признаками €вл€лись поражени€ верхних слоев эпидермальной ткани и, как следствие, неглубокие эрозии, напластовани€ гранул€ции, небольшие экссудативные процессы и периодический зуд. ѕораженные области часто были болезненными. –азличали две разновидности неглубокой пиодермии. ” щенков наблюдали быстро развивающиес€ поражени€ кожи в области паха, подгрудка, шеи и хвоста. ¬ литературе така€ пиодерми€ получила название «влажна€ экзема» или «мокнущий дерматит» или «летна€ экзема», так как ее про€влению способствовала жарка€ и влажна€ погода. Ќередко к подобной пиодермии приводили небольшие травмы кожи и аллерги€ к блохам.
√енерализованна€ форма глубокой пиодермии была установлена у 17 собак старше 7 лет. ѕри этом заболевание кожи сопровождалось фурункулезом,  изъ€звлением, увеличением региональных лимфатических узлов, обильным экссудативным процессов, интенсивным зудом и расчесами.

2.3. –езультаты микологических и клинических исследований собак при дерматофитозах

ѕри анализе статистических данных и собственных наблюдений  установлено, что у более 20% собак различных пород и возрастных групп с кожной патологией регистрируютс€ поверхностные микозы, основными возбудител€ми которых €вл€ютс€ Microsporum canis и Trichopyton  mentagrophytes.
¬сего микологическим исследовани€м подвергались 557 собак и 183 пробы волос с корочками, вз€тых с пораженных участков кожи (таблица 2).

“аблица 2.
–езультаты люминесцентного метода исследований.


ќбъект исследовани€
¬сего ќбнаружено свечение Ќе обнаружено свечение
¬сего % ¬сего %
—обаки, пораженные участки кожи 557 226 40,8 331 59,2
ѕатматериал из пораженных участков кожи 183 64 35,0 119 65,0
¬сего 740

280

37,8

440 62,2

ѕри положительном результате люминесцентного метода исследований исследовани€ обнаружено €рко зеленоватое, точечное отсвечивание, что составило более 40% от 557 исследованных животных. »з 183 проб волос с корочками такое отсвечивание обнаружено в 64 случа€х (35%).
 линические признаки трихофитии больных собак характеризовались в основном образованием толстых корочек в области полости шей, головы, конечностей. Ќаблюдалось преимущественно фолликул€рна€ форма, с резко выраженной воспалительной реакцией, экссудативными про€влени€ми. ѕри микроспорозе поверхностна€ форма болезни характеризовалась обламыванием и выпадением волос, образованием безволосых и шелушащих п€тен округлой формы.
“аким образом, как видно из вышеприведенных данных дерматомикозы  занимают важное место в кожной патологии собак. Ќужно отметить, что так называемый «стригущий лишай», как зооантропоноз, представл€ет серьезную опасность дл€ людей.

2.4. –езультаты арахнологических исследований собак, имевших признаки поражени€ кожного покрова

¬ последние годы в ветеринарной медицине специалистами все чаще приходитс€ сталкиватьс€ с проблемами кожной патологии собак, вызванными эктопаразитами – клещами, блохами, власоедами и вшами. Ќаиболее часто встречаемыми заболевани€ми по нашим наблюдени€м €вл€етс€ демодекоз, вызываемый подкожными клещом Demodex canis. ѕри клиническом осмотре и микроскопии соскобов из пораженных участков кожи 65 случаев из 273 исследованных собак был установлен диагноз демодекоз (таблица 3). ѕри клиническом осмотре у больных собак в основном отмечали локализованную форму демодекоза. ¬начале болезни наблюдали аллопецию, шелушени€ кожи, зуд в области пораженных участков. «атем образовывались облысевшие участки кожи, покрытые мелкими чешуйками ороговевшего эпидермиса серого цвета, которые легко снимаютс€ пинцетом. ¬ дальнейшем на месте пораженных участков по€вл€лись папулы – сыпь, в виде возвышенного на коже безполостного образовани€.

“аблица 3.
–езультаты микроскопии соскобов различных пород собак на демодекоз


є п/п

ѕороды собак
 оличество исследованных проб ќбнаружено Demodex canis
%
1 јнглийский бульдог 19 7 2,6
2 Ѕассет 14 3 1,1
3 Ѕоксер 26 11 4,0
4  олли 6 1 0,4
5 ћастино 9 3 1,1
6 ћопс 4 1 0,4
7 Ќемецкий дог 7 2 0,8
8 Ќемецка€ овчарка 77 14 5,1
9 “акса 28 4 1,4
10 —еттер 15 3 1,1
11 Ѕеспородные собаки 68 16 8,5
  ¬сего 273 65 23,8

” 4 собак из 65 больных демодекозом нами установлена генерализованна€ форма болезни. ѕри этом отмечали эрозийно-€звенные поражени€ кожи с участками, покрытыми гр€зно-желтыми струпь€ми, по€влени€ми сильного зуда и аллопеции.

2.5. –езультаты гематологических и иммунологических
исследований собак при пиодерми€х

ƒл€ проведени€ гематологических и иммунологических исследований нами были отобраны 25 собак с поверхностной и 17 собак с глубокой пиодермией. ћорфологические показатели крови собак при поверхностной и глубокой пиодерми€х приведены в таблице 4. ”становлено, что у собак с поверхностными и глубокими пиодерми€ми количество эритроцитов уменьшалось на 1 и 1,5 млн/мкл соответственно, по сравнению с показател€ми клинически здоровых собак. ќтмечаетс€ также снижение гемоглобина  более чем на 15% по сравнению со значением данного показател€ у клинически здоровых животных (140,9 г/л).

“аблица 4.
ћорфологические показатели крови собак при поверхностных и глубоких пиодерми€х

є п/п ѕоказатели ≈диницы измерени€  линически здоровые собаки ѕиодермии
ѕоверхностна€ √лубока€
1 Ёритроциты млк/мкл 6,55±0,19 5,45±0,24 5,06±0,1
2 √емоглобин г/л 140,9±3,37/td> 104,69 102,0±0,18
3 Ћейкоциты тыс/мкл 8,70±0,20 8,03±0,88 7,43±0,64
4 Ёозинофилы % 5,92±0,46 4,24±0,7 4,15±0,49
5 Ѕазофилы % 0 0 0
6 Ќейтрофилы п/€ % 2,55±0,48 4,16±0,07 5,05±0,51
7 Ќейтрофилы с/€ % 55,61±0,18> 62,18±0,2 66,3±0,25
8 ћоноциты % 3,36±0,18 3,37±0,4 4,04±0,11
9 Ћимфоциты % 30,06±0,58 21,4±0,63 20,09±0,13

” больных собак уменьшилось общее количество лейкоцитов на 5 и 14% соответственно при поверхностной и глубокой пиодерми€х. ¬ лейкоцитарной формуле отмечено уменьшение количества эозинофилов -  4,24 при поверхностной и 4,15 при глубокой пиодерми€х. ќтносительно резкие изменени€ претерпевают процентное соотношение сегменто€дерных нейтрофилов и лимфоцитов. ≈сли количество первых увеличилось на 10-12%, то вторых уменьшилось настолько же, что характерно дл€ острых воспалительных процессов.

–езультаты иммунологического анализа крови собак, больных поверхностной и глубокой пиодерми€х приведены в таблице 5, из которой видно что, почти все иммунологические показатели крови снижаютс€. “ак, уровень Igј снизилась при поверхностной пиодермии до 1,2 г/л, а при глубоких составл€ла 1,3, при норме 2,4г/л, а уровень IgG - 6,0 г/л при поверхностной и 5,7 г/л при глубокой пиодермии, при норме 6,2 соответственно.

“аблица 5.
»ммунологические показатели крови собак при поверхностной и глубокой пиодерми€х


є п/п

ѕоказатели
≈д. измерени€  линически здоровые собаки ѕиодермии
ѕоверхностна€ √лубока€
1 Ig ј г/л 2,4±0,11 1,2±0,18 1,3±0,42
2 Ig ћ г/л 0,96±0,14 1,1±0,24 0,86±0,54
3 Ig G г/л 6,2±0,98 6,0±0,91 5,7±0,72
4 Ћизоцимна€ активность % 11±0,92 10±2,25 9±1,26
5 Ѕактериальна€ активность % лизиса E.coli 66,4±0,56 46,4±0,56 46,6±0,44
6 ÷иркулирующие иммунные компоненты у.е. 22,4±1,2 18±0,62 18,2±0,66
7 ‘агоцитарна€ активность % 28,8±2,6 26,4±1,12 23,4±0,66
8 ‘агоцитарное число у.е 1,47±0,14 1,22±0,42 1,12±0,35
9 ‘агоцитарный индекс у.е 4,86±0,6 3,5±0,3 3,4±0,08

—низились также такие важные показатели иммунного статуса организма лизоцимна€, бактериальна€ и фагоцитарна€ активности крови, примерна на 10 и 20 %  при поверхностной и глубоких пиодерми€х соответственно.
“аким образом, обобща€ полученные нами результаты, иммунологических показателей, можно заключить, что у собак больных поверхностной и особенно глубокой пиодермией имеет место иммунодефицитное  состо€ние.

2.6. –езультаты гематологический и иммунологических
исследований при дерматомикозах

ƒл€ проведени€ гематологических и иммунологических исследований нами были отобраны  33 собаки с установленными диагнозам микроспори€ (23 головы)  и трихофити€ (10 голов). ¬озраст собак колебались от 1 до 3 лет.
ћорфологическа€ картина крови собак при дерматомикозах резким изменени€м не подвергаетс€, за исключением уменьшени€ количества лимфоцитов на 7,3%, что предполагает иммунодефицитное состо€ние организма. «начимым фактором €вл€етс€ увеличение количества  нейтрофилов –езультаты иммунологических исследований проб крови собак, больных дерматомикозами представлены в таблице 6. ѕри анализе данных таблицы статистически достоверных различий между иммунологическими показател€ми крови собак, больных трихофитией и микроспорией и клинически здоровыми животными не установлено, что предполагает иммунносупрессивное состо€ние организма.

“аблица 6
»ммунологические показатели крови собак при микроспории и трихофитии


ѕоказатели
≈д. измерени€  линически здоровые собаки ƒерматомикозы
ћикроспори€ “рихофити€
Ig ј г/л 2,4±0,11 2,6±0,14 2,3±0,42
Ig ћ г/л 0,96±0,14 0,89±0,12 0,91±0,63
Ig G г/л 6,2±0,98 5,1±0,66 6,4±0,14
Ћизоцимна€ активность % 11±0,92 14,3±0,37 11,6±0,12
Ѕактериальна€ активность % лизиса E.coli 66,4±0,56 67,09±0,36 64,2±0,44
÷иркулирующие иммунные компоненты у.е. 22,4±1,2 20,15±0,43 21,9±0,83
‘агоцитарна€ активность % 28,8±2,6 32,8±4,89 32,3±1,2
‘агоцитарное число у.е 1,47±0,14 1,56±0,33 2,1±0,4
‘агоцитарный индекс у.е

4,86±0,6 4,87 4,66±0,3

2.7. –езультаты иммунологических исследований при демодекозе собак

” больных локализованной формой демодекоза уровень IgG 33,73 мг/мл, что на 1,08% больше, а при генерализованной форме составл€ет 25,0 мг/мл, что на 8% ниже чем показатели клинически здоровых животных.
—редний уровень Igћ при локализованной форме демодекоза на 7% ниже, а при генерализованной форме 6,8%. ”ровень Igј была ниже на 5,68% при  локализованной форме и на 26,4 при генерализованной форме демодекоза. “аким образом при генерализованной форме демодекоза у собак происходит нарушение иммунорегул€торных механизмов, привод€щих к развитию селективной иммуносупрессии, обуславливающей низкий уровень IgM и IgA в сыворотке крови. ¬ тоже врем€, повышение концентрации IgG напр€мую св€зано с гуморальным иммунным ответом организма на воздействие антигенов клеща. ј при более «легкой» форме про€влени€ болезни (локализованна€ форма демодекоза) уровни всех классов иммуноглобулинов снижаютс€, что приводит к иммунодефицитному состо€нию организма.

2.8. ¬ли€ние –онколейкина® на гематологические и иммунологические показатели собак при пиодерми€х

ƒл€ определени€ лечебной эффективности –онколейкина при пиодермии собак и вли€ние его на гематологические и иммунологические показатели крови, было сформировано 4 группы животных.
1 группа – 20 больных поверхностной формой пиодермии. Ћечебна€ помощь больным была оказана с применением антисептических препаратов (3%-ный раствор перекиси водорода, 0,05%-ный раствор хлоргекседина), наложением антибактериальных мазей (линкомицинова€, эритромицинова€) и комплексного препарата «“ридерм». 2 группа  -  30 больных собак c поверхностной формой пиодермии, дл€ лечени€ которых кроме выше указанных лекарственных препаратов назначали раствор –онколейкина 3 инъекции через 24 часа, подкожно. 3 группа -  6 больных собак с диагнозом глубока€ пиодерми€. Ћечебные процедуры осуществл€ли так же, как животным 1 группы. 4 группа   -  7 больных с диагнозом глубока€ пиодерми€, лечение которых осуществл€ли так же, во 2 группе.
 линическими исследовани€ми установлено, что у собак 1 групп и 3 группы процесс заживлени€ поражЄнных участков кожи в основном протекал медленнее, чем у больных 2 и 4 групп. ’от€ признаки зуда, расчЄсов и экссудации у животных всех групп постепенно ослабл€лись и к концу курса лечени€ практически исчезли. ” 2-х животных из 20  1 группы и 3-х  3 группы и    1-го животного 4 группы через 20 дней (по окончанию курса лечени€) была установлена незначительна€ экссудаци€ серозного характера. ћорфологическа€ картина крови у животных опытных групп после курса лечени€ значительно улучшилась. ¬ частности увеличились количества эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов, а в лейкоцитарной формуле лимфоцитов. ќднако при сравнительном анализе данных по опытным группам имеют существенные различи€. “ак животным, которым лечебна€ помощь оказана с применением –онколейкина® (2 и 4 группы) практически вышеуказанные показатели крови на пор€док выше, чем у животных 1 и 3 группы.
Ќаиболее статистически достоверным изменени€м претерпевал уровень общего белка во всех опытных группах. “ак, если у животных 1 и 3 групп, подвергнутых лечению без применени€ –онколейкина®, снизилась на 8 и 15% соответственно, то 2 и 4 группах на 20 и 25%, что предполагает о положительном вли€нии данного препарата на протеиновый обмен в организме. ѕрослежива€ динамику уровней  Igј, отмечено что в 1 группе происходит его увеличение в 2 раза, во 2 группе 2,5 раза, в 3 – 1,4 и 4 в 2,5 раза. јналогичные данные получены и по IgG.
”ровень циркулирующих иммунных комплексов в 1 группе составл€л 18,0 у.е, во 2 – 19,3, в 3 - 20,0 и в 4 – 21,8, при норме 22,4 у.е., что так же свидетельствует о положительном вли€нии –онколейкина® на иммунную систему организма больных пиодермией собак.
јнализиру€ показатели неспецифической резистентности, нами вы€влено, что в 1 и 3 группах лизоцимна€ активность была значительно ниже 10% и 9,0% соответственно, чем у животных 2 и 4 групп (13,4 и 12,6% лизиса), где при лечении больных пиодермией собак, кроме антисептических, антибактериальных препаратов, примен€ли –онколейкин®. јналогические результаты были получены при расчете бактериальной и фагоцитарной активности. “ак в 1 группе бактериальна€ активность до лечени€ составл€ла 46,4 % лизиса E.сoli, после курса лечени€ 55,2, во 2 группе – 46,4 и 65,4, в 3-ей -  46,6 и 60,5. Ётот показатель у клинически здоровых животных был равен 66,4 % лизиса E.сoli. ‘агоцитарна€ активность нейтрофилов в 2 и 4 группах была значительно выше (в среднем 7%) чем, в 1 и 3 группах.
 линическое обследование животных показало, что при применении –онколейкина® (2 и 4 группы) у 90% животных с поверхностной пиодермиеи и 77% с глубокой, наблюдалось более интенсивное заживление поражЄнных участков кожного покрова, чем у животных 1 и 3 групп.
“аким образом, полученные результаты свидетельствуют об эффективности препарата –онколейкина® в комплексной терапии собак больных пиодермией.

2.9. ¬ли€ние –онколейкина® на гематологические и иммунологические показатели собак, больных дерматофитозом

— цель определени€ лечебной эффективности –онколейкина® в комплексной терапии и вли€ни€ его на гематологические и иммунологические показатели собак при дерматомикозах были сформулированы 2 группы больны животных по 26 голов в каждой. ¬ первой группе лечени€ больных животных проводили противогрибковыми препаратами (миколам, вакдерм, микосал, нитрофунгин, бакмикосептин), а во второй – кроме указанных препаратов использовали –онколейкин® по схеме, используемой при пиодерми€х собак.
»з результатов опыта следует, что у 17 из 26 больных животных первой группы без обострени€ клинических признаков дерматофитоза в течение 10-12-ти дней с начала курса лечени€ отмечали заживление поражЄнных очагов кожи, рост новых волос, отсутствие новых дерматофитозных очагов и нормализации гематологических и иммунологических показателей (таблица 8). ќднако у 9 больных собак заживление поражЄнных участков происходило медленно (в среднем на 7-15 дней больше) и у них же на коже были обнаружены скрытые дерматофитозные очаги. —редн€€ продолжительность выздоровлени€ больных собак по этой группе составл€ла 23 дн€.
¬о второй группе, где дл€ лечени€ собак, кроме препаратов назначенных животным первой группы, примен€ли –онколейкин® отмечены следующие клинические, иммуногематологические  изменени€: у 23-х из 26-ти больных собак на 7-8 дней после начала курса лечени€ произошли заживлени€ очагов поражени€ кожи, рост новы волос и отсутствие по€влени€ новых очагов инфекции; у 3-х больных животных клинические признаки болезни постепенно исчезали на 12-15 день после начало курса лечени€; морфологический состав крови характеризовалс€ увеличением общего количества лейкоцитов на 7% и лимфоцитов на 16,8%; при биохимическом исследовании отмечено уменьшении общего белка до уровн€ этого показател€ у клинически здоровых собак 64,7 г/л; из иммунологических показателей наиболее статистически достоверными были уровень гаммаглобулинов класса G, котора€ составила 6,7 г/л (±0,34),это даже больше на 0,5 г/л, чем у клинически здоровых животных;  средн€€ продолжительность выздоровлени€  собак составила 18 дней.

“аблица 7
ќсновные гематологические и иммунологические показатели собак, больных дерматомикозами (до и после лечени€), (ћ±m (n=0,7)


ѕоказатели

 линически
здоровых
животных

1 группа лечени€
без –онколейкина®

2 группа лечени€ с применением –онколейкина

Ёритроциты
(млн/мкл)
6,55 6,43 6,67
Ћейкоциты (ћЌ—/мкл) 8,70 7,94 8,84
Ћимфоциты(%) 30,06 22,1 30,20
ќбщий белок (г/л) 64,6 62,8 64,7
Ig (г/л) 2,4 2,3 2,6
Ig G (г/л) 6,2 5,5 6,7
Ћизоцимна€ јктивность (% лизиса) 11,62 12,7 13,2
Ѕактериальна€ активность (% лизиса E.coli) 66,4 64,2 65,8
÷иркулирующие иммунные комплексы (у.е.) 22,4 21,8 25,6
‘агацитарна€ активность (%) 28,8 32,9 32,4

ќтмечено также незначительное увеличение уровн€ Igј (на 0,2 г/л) по сравнению этого показател€ у клинически здоровых животных (таблица 7).
Ќеобходимо отметить, что показатели неспецифической резистентности (лизоцимна€, бактериальна€ и фагоцитарна€ активность) у больных собак и первой и второй групsпы особых изменений не претерпевали до и после оказани€ им лечебной помощи.

2.10. ¬ли€ние –онколейкина® на гематологические и иммунологические показатели собак, больных демодекозом

— целью изучени€ лечебной эффективности –онколейкина® в комплексе терапии больных демодекозом собак и вли€ни€ его на иммуно-гематологические показатели, нами были проанализированы результаты лечени€ 20 собак с локализованной 13 с генерализованной  формой.  онтролем служила группа больных животных в количестве 16 голов, которым были назначены только антипаразитарные препараты. «а животными всех опытных групп проводили ежедневные наблюдени€ в течение 30 дней, а до и после курса лечени€ брали кровь дл€ гематологических и гистологических исследований. Ќа 10-й и 25-й дни с начала лечени€ брали пробы соскобов кожи дл€ арахнологических исследований. Ѕольным собакам всех групп в качестве акарацидного препарата назначали ивермек, ивермек-гель, отодектин и баймек. ∆ивотным 2-ой группы, кроме антипаразитарных препаратов назначали мазь левомеколь.
 линическими исследовани€ми установлено, что у 20-ти животных с диагнозом локализованна€ форма демодекоза на 10-20 дни после начала курса лечени€ поражЄнные участки кожи полностью исчезали, постепенно уменьшались и затем отсутствовали экссудаци€, расчЄсы и зуды, на месте очагов поражени€ по€вились волосы. —редн€€ продолжительность полного выздоровлени€ равн€лась 18 дн€м. ѕри контрольных арахнологических исследовани€х соскобов, вз€тых из бывших пораженых участков кожи, клещей Demodex  не было обнаружено.
¬о второй опытной группе собак (диагноз генерализованна€ форма демодексоза) заживлени€ поражЄнных участков кожи происходило в€ло, медленно снижались и признаки расчЄса и экссудации. ” 3-х собак из 13 до конца курса лечени€ эти признаки так и не исчезли. ” остальных полное выздоровление было зарегистрировано на 30-35 дни после начала курса лечени€. ѕри контрольных исследовани€х соскобов кожи на 10-й день, клещи были обнаружены в 3-х пробах, а на 25 день только в одном случае. ѕродолжительность полного выздоровлени€ 10 собак этой группы составила 32 дн€.
¬ контрольной группе (3 группа) где 16 больным демодекозом (из них 12 локализированной и 4 генерализированной формой) как отмечено выше, лечебна€ помощь была оказана только с использованием  антипаразитарных препаратов, отмечено следующее: у животных локализированной формой пораженные участки кожи полностью разрослись волоски при отсутствии расчЄсов, экссудации, корочек и клещей. Ќа 22-28 дни у животных с генерализованной формой признаки поражени€ кожи в том числе расчЄсы, корочки и экссудаци€ продолжались (хот€ по интенсивности значительно меньшей степени) в сроки наблюдени€ - 35 дней.

“аблица 8.
ќсновные гематологические и иммунологические показатели собак, больных демодекозом (до и после лечени€)


ѕоказатели

 линически
здоровых
собак
1 группа. Ћокализованна€ форма
 демодекоза (с –онколейкином®)
2 группа. √енерализованна€ форма демодекоза (с –онколейкином®) 3 группа. ƒемодекоз. Ћечение без –онколейкна®

 

ƒо
 лечени€
ѕосле лечени€ ƒо
 Ћечени€
ѕосле лечени€ ƒо
Ћечени€
ѕосле лечени€
Ёритроциты
(млн/мкл)
6,55 5,8 6,47 5,9 6,7 6,9 6,43
Ћейкоциты (ћЌ—/мкл) 8,70 6,5 7,76 12,2 9,18 10,0 9,5
Ћимфоциты(%) 30,06 24,2 31,0 35 28 34 30
ќбщий белок (г/л) 64,6 76,4 66,8 79,8 63,7 72,8 60,2
Ig A   (г/л) 2,5 1,42 2,3 0,66 2,6 0,78 1,2
Ig G  (г/л) 31,26 33,73 31,8 25 30 26,8 28,4
Ig ћ  (г/л) 3,74 2,28 4,2 2,5 3,6 2,83 3,0
Ћизоцимна€ активность
(% лизиса)
11,62 10,3 14,3 9,2 11,6 9,4 10,0
Ѕактериальна€ активность
(% лизиса E.coli)
66,4 56,9 67,7 53,8 60,6 61,7 61,8
÷»  (у.е.) 22,4 20,4 23,7 19,0 22,0 20,6 21,2
‘агоцитарна€ активность (%) 28,8 22,5 27,7 21,8 28,3 24,3 25,6

–езультаты гематологических и иммунологически анализов до и после лечени€ собак, больных демодекозом представлены в таблице 9, из которой можно заключить: во всех опытных группах наблюдались увеличение (после курса лечени€) лейкоцитов,  процентного соотношени€ лимфоцитов в лейкоформуле. “ак же нормализировалс€ уровень общего белка в крови. “ак у животных 1 группы этот показатель до лечени€ был 76,4,   2-ой группы – 79,8 и 3-ей – 72,8 г\л, а после курса лечени€ снизилась до значени€ 66,8, 63,7. » 60,2 при норме 64,6 г\л; в 1 и 2 группах после лечени€ резко, на 24-40% увеличилс€ уровень Ig A , Ig G и Ig ћ, что свидетельствует о положительном вли€нии –онколейкина® на иммунную систему организма больных демодекозом собак. ¬ третьей группе, где лечение больных осуществл€лось без применени€ –онколейкина®, показатели иммуноглобулинов практически оказались на том же уровне, что и до лечени€; отмечено увеличение циркулирующих иммунных комплексов в 1 и 2 группах после лечени€ на 7 и 12% соответственно и всего на 3% у животных третьей группы.
“аким образом, применение –онколейкина® в комплексе с антипаразитарными препаратами локализованной и особенно генерализированной формах демодекоза собак, положительно вли€ет на клинико-гематологические и иммунологические показатели больных животных.

3. ¬џ¬ќƒџ

  1. ѕри клиническом осмотре 328 собак с признаками поражени€ кожного покрова в 102 случа€х установлена поверхностна€, в 62 - локальна€ и в 17 случа€х - генерализованна€ формы пиодермии. “ипичными местами локализации кожных поражени€ - брюшна€ стенка, пахова€ область, у основани€ ушных раковин и внутри уха, спинки носа и между пальцами.
  2. ѕри клиническом осмотре 328 собак с признаками поражени€ кожного покрова в 102 случа€х установлена поверхностна€, в 62 – локальна€ и в 17 случа€х – генерализованна€ формы пиодермии. “ипичными местами локализации кожных поражени€  - брюшна€ стенка, пахова€ область,  у основани€ ушных раковин и внутри уха, спинки носа и между пальцами.
  3. ѕри бактериологических исследовани€х соскобов кожи, вз€тых из пораженных очагов, были изолированы различные бактерии (стафилококки, стрептококки, кишечна€ и  синегнойна€ палочки, протей) в чистых культурах и в различных ассоциаци€х. ¬едущее место (более 70% случаев) в этих ассоциаци€х, суд€ по частоте выделени€, занимали стафилококки
  4. ¬ результате микологических исследований проб волос с корочками, вз€тых с пораженных участков кожи 483 собак, в 132 случа€х установлена микроспори€ и в 163 трихофити€. ¬ результате клинических и арахноэнтомологических исследований соскобов кожи у 165 собак из 1264-х был установлен демодекоз, что составил 13%. ’арактерными признаками болезни €вл€лись: аллопеци€, зуд в области пораженных участков, облысевшие очаги, покрытые мелкими чешуйками, папулы и экссудативное воспаление с образованием пузырьков.
  5. √ематологическими и иммунологическими исследовани€ми крови, вз€тых от больных пиодермией, установлены снижение общего количества эритроцитов на более чем 1 млн/мкл, уменьшение уровн€ гемоглобина на 15% и лейкоцитов в среднем на 10%. ќтмечено также увеличение показател€ общего белка олее 85 г/л при норме 40-73 г/л, что свидетельствует о высокой интенсивности и динамичности инфекционного процесса при пиодерми€х. ”становлено снижение уровн€ IgA на 1,2 г/л, лизоцимной, бактерицидной и фагоцитарной активности крови в среднем на 15%, что характерно дл€ гнойных воспалительных процессов и иммунодефицитных состо€ний.
  6. —татистически достоверных различий между иммунологическими показател€ми крови собак, больных трихофитией и микроспорией и клинически здоровыми животными не установлены, что позвол€ет предположить иммуносупрессивное состо€ние организма.
  7. ѕри демодекозе в крови собак установлено снижение уровн€ гемоглобина на 17%, увеличение количества эозинофилов на 20% и лимфоцитов на 14% на фоне резко выраженного лейкоцитоза. ќтмечено также динамическое повышение уровн€ общего белка в среднем на 20%, глюкозы – на 4%, билирубина  и холестерина, что предполагает нарушени€ функциональной де€тельности печени. ”ровень иммуноглобулинов A и M в 2 раза ниже, чем у здоровых животных, а уровень  IgG в пределах нормы или незначительно повышен, что характерно дл€ иммуносупрессивных и иммунодефицитных состо€ний организма.
  8. ¬ услови€х проведЄнных экспериментов установлено, что трЄхкратное подкожное введение –онколейкина® в дозе 10000 ME собакам способствует:
    • у больных пиодермией в комплексе с антибактериальными препаратами повышению количества лимфоцитов и моноцитов, снижению уровн€ палочко€дерных нейтрофилов и общего белка, увеличению уровней IgA, IgC и циркулирующих иммунных комплексов, повышению лизоцимной, бактериальной и фагоцитарной активности крови, более интенсивному заживлению пораженных участков кожи и сокращению сроков выздоровлени€ на 3-5 дней.
    • у больных дерматофитозами в комплексе с противогрибковыми препаратами увеличению общего количества лейкоцитов на 7%, уменьшению содержани€ общего белка до уровн€ этого показател€ у клинически здоровых животных, стабилизации уровн€ IgA и иммуноциркулирующих комплексов, более интенсивному заживлению очагов поражени€ кожи, росту новых волос и отсутствию новых очагов поражени€, что свидетельствует об иммунокорректирующем свойстве –онколейкина®.
    • у больных демодекозом в комплексе с антипаразитарными препаратами увеличению количества лейкоцитов и стабилизации процентного соотношени€ лимфоцитов в лейкоформуле, снижению уровн€ общего белка на 17% и увеличению на 25-40% уровней иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов, что предполагает о положительном вли€нии препарата на иммунную систему организма.

4. ѕ–ј “»„≈— »≈ ѕ–≈ƒЋќ∆≈Ќ»я

ћатериалы научных исследований включены в методический разработки:

  • методические положени€ по определению иммунного статуса животных, утверждена академик-секретарем отделени€ ветеринарной медицины –ј—’Ќ 01.06.2011г. 
  • методические рекомендации по применению препарата –онколейкина® в комплексной терапии собак при кожных патологи€х разного генза, утвержденных директором ¬Ќ»“»Ѕѕ академиком –ј—’Ќ, профессором ј.я.—амуйленко 27 сент€бр€ 2011 года;
  • теоретические и практические результаты диссертации используютс€ в учебном процессе при изучении студентами дисциплин «Ёпизоотологи€ и инфекционные болезни» и «ѕаразитологи€ и инвазиозные болезни животных» в ћ√ј¬ћиЅ;
  • метод  лечени€ собак, больных пиодермией, дерматомикозами и демадекозом с использованием препаратов –онколейкина® и гипохлорита натри€ внедрен в практику ветеринарных клиник «Ћебеди», «ќберег», и «ёниор» города ћосквы.

5. —писок опубликованных работ по теме диссертации

  1. ћасимов Ё.Ќ. Ёффективность –онколейкина® в комплексной терапии собак при пиодермии /ћасимов Ё.Ќ.// «¬етеринари€ и кормление». – 2011, є3, с.-39-40
  2. ћасимов Ё.Ќ. Ёффективность препарата –онколейкин в комплексной терапии собак при демодекозе/ћасимов Ё.Ќ.// «–оссийский паразитологический журнал», є3, с. – 62-64
  3. ћасимов Ё.Ќ. јнализ применени€ гипохлорита натри€ и препарата –онколейкин® при гнойных дерматитах собак/ћасимов Ё.Ќ.// ¬етеринарна€ медицина домашних животных: —борник статей. ¬ыпуск 7,  азань, 2010, с.184-186
  4. ‘едоров ё.Ќ. »ммунодфициты собак: характеристика, диагностика, иммунокоррекци€/‘едоров ё.Ќ.,  люкина ¬.»., ћасимов Ё.Ќ.//јктуальные проблемы ветеринарии и животноводства: ћатериалы ћежрегиональной научно-практической конференции. – —амара, 2010. – с.321-331
  5. ‘едоров ё.Ќ. јлгоритмы в диагностике иммунодефицитов животных / ‘едоров ё.Ќ.,  люкина ¬.»., Ѕогомолова ќ.ј., ћасимов Ё.Ќ. // «адачи ветеринарной науки в реализации доктрины продовольственной безопасности –оссийской ‘едерации. ћатериалы международной научной научно-практической конференции 16-17 марта 2011г. – ѕокров, 2011. – —. 154-156.
  6. ћасимов Ё.Ќ. √ематологические изменени€ при кожных патологи€х собак/ћасимов Ё.Ќ.// ¬опросы физико-химической биологии в ветеринарии - —борник научных трудов ћ√ј¬ћиЅ. – 2011, с.75-78

 

 

–ѓ–љ–і–µ–Ї—Б.–Ь–µ—В—А–Є–Ї–∞