Ѕиотех√лавна€–онколейкинћеханизм действи€јдъювант вакцин

ћ≈’јЌ»«ћ ƒ≈…—“¬»я »Ќ“≈–Ћ≈… »Ќј-2 – –ќЌ ќЋ≈… »Ќј®


ѕќ¬џЎ≈Ќ»≈ Ё‘‘≈ “»¬Ќќ—“» ¬ј ÷»Ќј÷»»:
ѕ–»ћ≈Ќ≈Ќ»≈ –ќЌ ќЋ≈… »Ќј® ¬  ј„≈—“¬≈ јƒЏё¬јЌ“ј ¬ј ÷»Ќ

 

1. –ќЋ№ »Ќ“≈–Ћ≈… »Ќј-2 (IL-2) ¬ –≈√”Ћя÷»» √”ћќ–јЋ№Ќќ√ќ (¬- Ћ≈“ќ„Ќќ√ќ) «¬≈Ќј »ћћ”ЌЌќ√ќ ќ“¬≈“ј

јдъюванты - вещества, неспецифически усиливающие иммунный ответ. —тимулирующее действие адъювантов €вл€етс€ результатом трех основных процессов:

  • интенсификации специфических и неспецифических механизмов иммуногенеза (усиление макрофагальной реакции, стимул€ци€ “- и ¬-лимфоцитов, усиление синтеза антител и неспецифических глобулинов, некотора€ интенсификаци€ воспалительной реакции);
  • изменени€ агрегативного состо€ни€ антигена Ц корпускулирование его и более интенсивное включение в лимфоидные органы;
  • образование депо антигена в месте введени€, пролонгирование циркул€ции антигена, замедление гидролиза антигенных молекул тканевыми ферментами (суммаци€ антигенных воздействий).

¬ насто€щее врем€ в качестве эффективного адъюванта вакцин интенсивно изучаетс€ интерлейкин-2.

»нтерлейкин-2 (IL-2) Ц один из ключевых звеньев цитокиновой сети, котора€ обеспечивает межклеточные взаимодействи€ при реализации иммунореактивности. IL-2 продуцируетс€ CD4-позитивными лимфоцитами: Th0 и Th1 в ответ на антигенную стимул€цию или под вли€нием активационного сигнала со стороны IL-1.

IL-2 занимает важное место в иммуногенезе (рис.1), а его биологическое действие-многообразно. IL-2, прежде всего €вл€етс€ “-клеточным ростовым фактором - способствует поддержанию длительного роста “-лимфоцитов в культуре. ƒанный цитокин активирует процессы пролиферации и дифференцировки “-лимфоцитов и натуральных киллеров, регулирует экспрессию на цитоплазматических клеточных мембранах рецептора IL-2R и других молекул и рецепторов клеточной адгезии, а также продукцию самого IL-2, гамма-»‘Ќ и других цитокинов. ѕомимо этого, IL-2 стимулирует пролиферацию ¬-лимфоцитов, макрофагов, Ќ -клеток. —екреци€ IL-2 €вл€етс€ необходимым условием дл€ всего дальнейшего хода активации иммунокомпетентных и некоторых других клеток.  роме митогенного эффекта, IL-2 потенцирует продукцию р€да лимфокинов, клетками-мишен€ми дл€ которых €вл€ютс€ “-лимфоциты, ¬-лимфоциты, Ќ -клетки и макрофаги, причем все эти медиаторы усиливают иммунный ответ за счет функциональной активности указанных клеток. IL-2 стимулирует пролиферацию обоих типов “-хелперов и только в его присутствии достигаетс€ оптимальный уровень пролиферативного ответа лимфоцитов.

–ис. 1. –оль IL-2 в регул€ции иммунного ответа.

IL-2 стимулиру€ продукцию других цитокинов, он в том числе, повышает продукцию таких цитокинов, как IL-4 и IL-5 (¬ –‘ - ¬-клеточный ростовой фактор). IL-4 продуцируетс€ активированными CD4+ “-лимфоцитами (Th2), он регулирует рост и дифференциацию ¬-лимфоцитов, а также регулирует процесс биосинтеза ими антител. IL-5 индуцирует конечную дифференцировку поздних B-клеток в иммуноглобулин-секретирующие клетки. “аким облазом, IL-2 опосредованно вызывает рост и дифференциацию ¬-клеток, в результате чего повышаетс€ продукци€ плазматичесими клетками иммуноглобулинов (рис.2).

–ис. 2. –оль IL-2 в регул€ции гуморального (¬-клеточного) звена иммуннитета.

”читыва€ оказываемое IL-2 действие на компоненты иммунной системы, можно с уверенностью говорить и о перспективности его использовани€ в качестве адъювантов вакцин. Ёто положение уже нашло свое отражение в исследовани€х отечественных и зарубежных ученых.

“ак, Tarasov V.ј. и соавт. (1999) изучали эффективность IL-2 в качестве адъюванта аутологичной вакцины, созданной дл€ лечени€ пациентов с онкологической патологией. Ўестьдес€т п€ть пациентов с четвертой стадией рака толстой кишки были подвергнуты комбинированному хирургическому и иммунотерапевтическому лечению, по окончании которого авторы работы сделали следующие заключени€:

  • хирургическое удаление большой массы опухоли Ц необходима€ предпосылка дл€ эффективного иммунотерапевтического лечени€;
  • вакцина должна содержать живые опухолевые клетки, адекватно представл€ющие опухолевые антигены;
  • прививка, проведенна€ аутологичными клетками опухоли с использованием Ѕ÷∆-вакцины в качестве адъюванта и IL-2, как иммуностимул€тора, эффективно предотвращает метастазирование после успешной операции.

Maes R. F. (1999) получил положительные результаты при сочетаном применении вакцины Ѕ÷∆ с IL-2, который существенно повышал иммуногенность вакцины. ѕо мнению автора, сочетанное применение Ѕ÷∆ с IL-2 перспективно дл€ эффективной профилактики и терапии туберкулеза.

Barouch D. H. et al. (1998) установили, что дл€ эффективной выработки у мышей иммунного ответа на ƒЌ -вакцину ¬»„-1 первоначально животным необходимо вводить специфический антиген, а затем IL-2.   аналогичному выводу в своих исследовани€х пришли Sasaki S. et al. (1998), оценивавшие иммунологическую эффективность ƒЌ -вакцины ¬»„-1, примененной в сочетании с IL-2.

Anderson G. et al. (1987) было показано, что »Ћ-2 усиливал иммунный ответ свиней на введение вакцины Hemophilus pleuropneumonia. —овместное введение вакцины с IL-2 и дальнейшее введение IL-2 в течение 5 сут приводило к уменьшению количества животных с поражени€ми легких (менее 1 %). ¬ группе животных, которых иммунизировали только вакциной, этот показатель составил 32 %. Ѕолее того, протективный эффект вакцинации был больше (поражени€ легких менее, чем у 1 % животных) если IL-2 вводили многократно, а не однократно (поражени€ легких у 16 % животных).

Ѕолее выраженный иммунный ответ нон-респондентов на иммунизацию вакциной гепатита B наблюдали в случае, когда через один час после вакцинации вводили IL-2 в дозе 2,5х105 U. ѕри этом, образование антител удалось зарегистрировать через 15 недель после иммунизации, а у пациентов, которых иммунизировали только вакциной, иммунного ответа на ее введение не было.

 линические испытани€ проходила вакцина дл€ лечени€ метастатической меланомы, в которой в качестве антигена используетс€ модифицированный иммунодоминантный пептид gp100 (меланома-меланоцитдифференцирующий антиген). ¬ качестве адъюванта при создании вакцины использовали IL-2. ѕо данным исследователей у 38 % больных, которым вводили пептидную вакцину в сочетании с IL-2, произошла регресси€ опухоли.

Basak S. et al. (2000) исследовали рекомбинантную вакцину на основе гена, кодирующего синтез ассоциированного с опухолью толстой кишки антигена GA733, с »Ћ-2 дл€ лечени€ колоректального рака в модельных экспериментах на мышах. ” животных под вли€нием иммунизации происходило значительное ингибирование роста опухоли у мышей.

Li Wen B. O. et al. (1999) исследовали вли€ние рекомбинантного IL-2 на активность ƒЌ -вакцины против вируса гепатита ¬. ¬ экспериментах на мышах линии Balb/c авторы показали, что применение в ассоциации с ƒЌ -вакциной этого препарата значительно повышало ее иммунологическую эффективность как в отношении продукции HBs-антител, так и пролиферации лимфоцитов. јналогичный эффект наблюдалс€ Bronte V. et al. (1995) при иммунизации мышей препаратами рекомбинантного IL-2 в сочетании с поксвирусной рекомбинантной вакциной. ¬ результате применени€ такой схемы иммунизации иммунологическа€ эффективность последней заметно возростала.

Weinberg A. et al. (1988) зарегистрировали усиление иммунного ответа в модельных экспериментах на морских свинках, иммунизированных экстрактами вируса простого герпеса (HSV-2) или рекомбинантным гликопротеином D, выделенным из HSV-2, в сочетании с рекомбинантным IL-2. ѕри этом последний вводили животным подкожно в течение 17 сут после иммунизации в разовой дозе 5х104 U. ” животных, иммунизированных обоими вакцинными препаратами в сочетании с рекомбинантным IL-2, клинические показатели были лучше, чем у животных, иммунизированных только вакцинами. Ѕолее того, отмечена коррел€ци€ цитотоксической активности и протективного эффекта вакцин, усиленных рекомбинантным IL-2. »нтересными оказались результаты, полученные после повторного заражени€ этих животных (через 2 мес) HSV-2 вирусом. «ащитный эффект составил 75 %. —ходные результаты были получены и Hasama M. et al. (1993), использовавшим дл€ иммунизации рекомбинантную герпетическую вакцину, усиленную рекомбинантным IL-2.

ѕо-нашему мнению, рекомбинантный интерлейкин-2, препарат –онколейкин, производимый компанией ќќќ ЂЌѕ  ЂЅ»ќ“≈’ї, можно использовать в качестве адъюванта:

  • дл€ повышени€ иммуногенности существующих вакцинных препаратов (при проведении иммунизации в эпидемически и эпизоотологически опасных ситуаци€х, при встрече с генетически-измененными штаммами возбудителей инфекций, в других случа€х повышенного риска возникновени€ инфекций);
  • при иммунизации животных, подверженных воздействию неблагопри€тных факторов окружающей среды;
  • дл€ повышени€ эффективности вакцинотерапии животных с онкологической и гематологической патологией;
  • при разработке новых вакцин, в том числе, рекомбинантных и ƒЌ -вакцин нового поколени€.

¬ последние годы нами были проведены р€д исследований по изучению адъювантных свойств IL-2 при вакцинации животных (собак, крупного рогатого скота, свиней), разработаны схемы применени€ препарата –онколейкин с целью повышени€ эффективности вакцинации.

[наверх]

2. ѕ–»ћ≈Ќ≈Ќ»≈ –ќЌ ќЋ≈… »Ќј® ¬  ј„≈—“¬≈ јƒЏё¬јЌ“ј ¬ј ÷»Ќ ” —ќЅј 

–екомендуетс€ препарат –онколейкинЃ использовать одновременно с вакцинацией, но в разных шприцах, подкожно в дозе 5000 ћ≈/кг однократно.

¬ результате:

  • усиливаетс€ иммунный ответ организма на введение вакцины - титры антител в сыворотке крови животных, которым одновременно вводили –онколейкинЃ и вакцину, выше в 1,5 - 3 раза по сравнению с животными, которых вакцинировали без применени€ –онколейкинаЃ;
  • увеличиваетс€ веро€тность успешного проведени€ вакцинации Ц иммунный ответ на введение вакцины одновременно с –онколейкиномЃ наблюдаетс€ у 100 % животных.

[наверх]

3. ѕ–»ћ≈Ќ≈Ќ»≈ –ќЌ ќЋ≈… »Ќј® ¬  ј„≈—“¬≈ јƒЏё¬јЌ“ј ¬ј ÷»Ќ ”  –”ѕЌќ√ќ –ќ√ј“ќ√ќ — ќ“ј

—хема применени€: дл€ повышени€ эффективности вакцинации препарат –онколейкин® используетс€ за 48 часов до вакцинации или одновременно с вакцинацией, однократно, подкожно, взрослым в дозе 1000 ћ≈/кг, молодн€ку - 2000 Ц 3000 ћ≈/кг. ¬акцину и –онколейкин® не рекомендуетс€ смешивать.

ѕример: ¬ «јќ Ђ–абитицыї Ћенинградской области примен€ли –онколейкина® с целью повышени€ эффективности вакцинации тел€т на 15-й день жизни одновременно с первым введением вакцины против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 производства ¬Ќ»»«∆. ¬торое введение вакцины проводили без применени€ –онколейкина® через 14 дней после первого, контролировали титр антител через 14 дней после второго введени€ вакцины. ѕри этом, уровень антител в сыворотке крови животных опытной группы значительно повышалс€ (табл.3).

“аблица 3. ¬ли€ние применени€ –онколейкина® при вакцинации тел€т на уровень антител в сыворотке крови

√руппа животных  оличество животных “итры антител
инфекционный ринотрахеит вирусна€ диаре€ респираторно-синцитиальна€ инфекци€ парагрипп-3
ќпытна€ (вакцинаци€ + –онколейкин®) 5 1:64 Ц 1:128 1:128 -1:256 1:64 Ц 1:512 1:16 - 1:32
 онтрольна€ (вакцинаци€) 5 1:32 Ц 1:64 1:64 - 1:128 1:64 Ц 1:128 1:8 - 1:16

–онколейкин® рекомендуетс€ также примен€ть при вакцинации глубокостельных коров и нетелей.

ѕример: ¬ ‘√”ѕ Ђ лЄново-„егодаевої –ј—’Ќ ћосковской области титр противовирусных антител в сыворотке крови животных, вакцинированных с –онколейкином®, был выше в 2-8 раз, по сравнению с глубокостельными одностадницами, которым препарат не вводилс€ (табл.4).

 олостральный иммунитет у тел€т, полученных от выше указанных коров и нетелей, оценивали по величине титров специфических вируснейтрализующих антител в сыворотке крови на 10 Ц 14 день их жизни (табл. 5).  онтролем €вл€лс€ молодн€к, получавший молозиво от матерей, вакцинированных без –онколейкина®.

“аблица 4. ¬ли€ние –онколейкинаЃ на уровень антител в сыворотке крови при вакцинации глубокостельных коров и нетелей

√руппы коров-матерей  оличество животных “итры антител на введение вакцины
инфекционный ринотрахеит парагрипп-3 вирусна€ диаре€ ротавирусна€ инфекци€
ќпытна€ (вакцинаци€ + –онколейкин®) 4 1:512 - 1:4096 1:256 - 1:1024 1:32 - 1:128 1:64 - 1:128
 онтрольна€ (вакцинаци€) 8 1:8 - 1:512 1:32 - 1:256 1:2 - 1:64 1:2 - 1:32

“аблица 5. ¬ли€ние –онколейкина® на уровень колостральных антител в сыворотке крови тел€т на 10Ц14 день жизни при вакцинации их матерей

√руппы животных „исло тел€т-потомков “итры антител на введение вакцины
инфекционный ринотрахеит парагрипп-3 вирусна€ диаре€ ротавирусна€ инфекци€
ќпытна€ (вакцинаци€ матерей + –онколейкин®) 4 1:128 - 1:2048 1:128 - 1:512 1:32 - 1:64 1:32 - 1:64
 онтрольна€ (вакцинаци€ матерей) 8 1:4 - 1:256 1:16 - 1:128 1:2 - 1:32 1:2 - 1:16

“итр специфических вируснейтрализующих антител у тел€т, получавших молозиво от коров, иммунизированных с применением –онколейкинаЃ, оказалс€ значительно выше по сравнению со сверстниками, которым выпаивали молозиво от матерей, подвергнутых вакцинации без –онколейкинаЃ.

ƒл€ подготовки животных-доноров при выработке гипериммунных и типоспецифических сывороток –онколейкин® рекомендуетс€ использовать одновременно с каждой иммунизацией животных-доноров подкожно в дозе 1000 - 3000 ћ≈/кг.

ѕример: ¬ процессе проведенных экспериментов в ‘√”ѕ Ђ лЄново-„егодаевої –оссельхозакадемии ћосковской области установили, что применение –онколейкина® в качестве адъюванта привело к значительному увеличению у доноров титра антител к вирусам (табл.6).

“аблица 6. ¬ли€ние –онколейкина® на уровень антител в сыворотке крови коров-доноров при их гипериммунизации

√руппа „исло доноров “итры антител на введение вакцины
инфекционный ринотрахеит парагрипп-3 вирусна€ диаре€ аденовирусные инфекции
ќпытна€ 4 1:2048 Ц 1:4096 1:1024 Ц 1:2048 1:128 Ц 1:512 1:1024 Ц 1:4096
 онтрольна€ 4 1:512 Ц 1:1024 1:512 Ц 1:1024 1:64 Ц 1:256 1:256 Ц 1:1024

¬ сыворотке крови доноров титр антител при применении –онколейкина® выше в 2-8 раз по сравнению с животными, которых иммунизировали без его применени€ (табл.6). ”величение концентрации антител позвол€ет более эффективно использовать получаемую гипериммунную сыворотку дл€ профилактики вирусных инфекционных заболеваний в стаде.  роме этого, предоставл€етс€ возможность еЄ экономного расходовани€ за счет уменьшени€ дозы, вводимой молодн€ку.

¬ результате применени€ препарата в качестве адъюванта вакцин:

  • усиливаетс€ иммунный ответ организма на введение вакцины - титры антител в сыворотке крови животных, которым одновременно вводили –онколейкин® и вакцину, выше в 2-8 раз по сравнению с животными, которых вакцинировали без применени€ –онколейкина®;
  • увеличиваетс€ веро€тность успешного проведени€ вакцинации Ц иммунный ответ на введение вакцины одновременно с –онколейкином® наблюдаетс€ у 100% животных;
  • увеличиваетс€ устойчивость организма к инфекци€м, значительно снижаетс€ заболеваемость;
  • повышаетс€ сохранность животных;
  • при применении –онколейкина® у глубокостельных коров одновременно с вакцинацией, колостральный иммунитет у тел€т более напр€женный.

[наверх]

4. ѕ–»ћ≈Ќ≈Ќ»≈ –ќЌ ќЋ≈… »Ќј® ¬  ј„≈—“¬≈ јƒЏё¬јЌ“ј ¬ј ÷»Ќ ” —¬»Ќ≈…

¬ качестве адъюванта вакцин препарат –онколейкин® рекомендуетс€ использовать за 48 часов до вакцинации или одновременно с вакцинацией, внутримышечно или подкожно, в дозе 2000 - 3000 ћ≈/кг однократно. ¬акцину и –онколейкин® не смешивать не рекомендуетс€ (рис.2).

¬ результате:

  • усиливаетс€ иммунный ответ организма на введение вакцины - титры антител в сыворотке крови животных, которым одновременно вводили –онколейкин® и вакцину, выше в 1,5-3 раза по сравнению с животными, которых вакцинировали без применени€ –онколейкина®;
  • увеличиваетс€ веро€тность успешного проведени€ вакцинации Ц иммунный ответ на введение вакцины одновременно с –онколейкином® наблюдаетс€ у 100 % животных;
  • увеличиваетс€ устойчивость организма к инфекционным заболевани€м, значительно снижаетс€ заболеваемость;
  • повышаетс€ сохранность животных;
  • при применении –онколейкина® одновременно с вакцинацией свиноматок, колостральный иммунитет у порос€т более напр€женный.

ѕример: ¬ «јќ ЂЌовгородский беконї проведен производственный опыт по применению препарата –онколейкин® по схеме, приведенной на рис. 3, с целью повышени€ эффективности вакцинации порос€т.

¬етеринарные обработки проводились согласно технологии и плана профилактических и противоэпизоотических меропри€тий. ѕорос€там опытной группы вводили –онколейкин® в дозе 50 000 ћ≈ на голову в 25-дневном возрасте. „ерез 24 часа вводили вакцину против респираторного синдрома и Ђпослеотъемного залеживани€ї. ѕовторное введение –онколейкина® проводили в 40 дней в дозе 75 000 ћ≈ на голову за 5 дней до вакцинации против классической чумы свиней. –езультаты опыта представлены в табл. 13 и 14.

“аблица 13. –езультаты применени€ –онколейкина® в «јќ ЂЌовгородский беконї у порос€т-сосунов

√руппа животных

є корпуса

 оличество порос€т, гол

»з низ

—охранность, %

—редне- суточный привес, г

пало

вынужденный убой

гол

%

гол

%

 онтрольна€1

4

230

1

0,4

4

1,7

97,8

265

ќпытна€ 1

250

1

0,4

2

0,8

98,8

292

 онтрольна€2

28-29

688

82

11,9

13

1,9

86,2

275

ќпытна€ 2

741

38

5,1

5

0,7

94,2

285

“аблица 14. –езультаты применени€ –онколейкина® в «јќ ЂЌовгородский беконї у порос€т на доращивании

¬ результате применени€ –онколейкинаЃ по

√руппа животных

 оличество, гол

»з них

—охран- ность %

—редне- суточный привес, г

ѕередано на откорм, гол

пало

вынуж- денный убой

по причине
брохо- пневмонии

гол

%

гол

%

гол

%

 онтрольна€1

225

8

3,6

15

6,7

13

5,8

89,8

500

202

ќпытна€1

247

2

0,8

5

2,0

0

0

97,2

570

240

выше приведенной схеме в «јќ ЂЌовгородский беконї (табл.13) у порос€т-сосунов сохранность возрастала на 1 - 8 %, увеличились среднесуточные привесы на 10 - 27 грамм.

ѕри этом, при переводе порос€т на доращивании в группы откорма (табл.14) сохранность в опытных группах возросла на 7,4 %, а среднесуточный привес увеличилс€ на 70 грамм.  роме этого в опытных группах значительно снизилась заболеваемость бронхопневмони€ми на 5,8 %, что отразилось на вынужденном убое, который сократилс€ на 4,7 %.

[наверх]


Ћитература

—тепанов ј.¬., —виридов Ћ.ѕ., ƒобрынин ¬.ћ. и др.
—качать в PDF
ѕерспективы применени€ ронколейкина в качестве адъюванта вакцин.
—анкт-ѕетербург: изд-во "»здательский ƒом "Ќовости ѕравопор€дка". 2006. 52 с.

Ќикитина “.Ќ., јвдеева ∆.». —качать в формате Adobe Acrobat (412.2 Kб) —качать в PDF
»ммуноадъювантное действие цитокинов.
Ѕ»ќпрепараты. 2008. є 1 (29). —. 16-20.

√речухин ј.Ќ., ћоисеев ј.Ќ.—качать в формате Adobe Acrobat (171.7 Kб) —качать в PDF
ѕовышение эффективности вакцинации порос€т иммунокорректором ронколейкин.
–оссийский ветеринарный журнал, —ельскохоз€йственные животные. 2012, є 2, с. 45-46.

ћоисеев ј.Ќ., Ќекрасов ј.ј., √речухин ј.Ќ., Ѕарышников ѕ.».—качать в формате Adobe Acrobat (232.1 Kб) —качать в PDF
ѕовышение эффективности вакцинации крупного рогатого скота иммунокорректором ронколейкин.
–оссийский ветеринарный журнал. —ельскохоз€йственные животные. 2014, є 1, с. 34-35

 

–ѓ–љ–і–µ–Ї—Б.–Ь–µ—В—А–Є–Ї–∞